讯阳文艺网双缩脲试剂配制和使用方法？
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液；
双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液.
先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL，振荡均匀（营造碱性环境），再加入1～2滴双缩脲试剂B，振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
延伸阅读
检测蛋白质时把双缩脲试机A液与B液先混合再加入会怎样？
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液； 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。如果混合加入，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的 浓度加大几十倍，如果两者的浓度与蛋白质能产生明显的反应的剂量下，是没有什么影响的
为什么斐林试剂和双缩脲试剂的使用方法不同？
斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同：
（1）溶液浓度不同
斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂中NaOH溶液（双缩脲试剂A）的浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/ml.
（2）使用原理不同
斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）.
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应.双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应.而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在.
（3）使用方法不同
斐林试剂使用时,先将NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中）,而后立即使用：双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液（2mL）,振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象.
双缩脲试剂检验蛋白质的原理和条件？
双缩脲法
用于鉴定蛋白质的分析方法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋白质单位1-10mg。
基本信息
中文名
双缩脲法
外文名
Biuret method
成分
氢氧化钾、硫酸铜、酒石酸钾钠
名词解释
双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾，可延长试剂的使用寿命。
基本概况
实验原理
双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。
试剂与器材
1. 试剂：
1.
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。
（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4·5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
2. 器材：
1.
2. 器材：
可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
操作方法
1.
标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。
双缩脲试剂是什么颜色？
双缩脲试剂是蓝色。双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1 g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01 g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾，会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀，从而使试剂失效。
双缩脲试剂是什么配制的？
是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液； 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
斐林试剂和双缩脲试剂有什么区别？
1、作用不同：斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应。
2、配置方法不同：
斐林试剂配制方法：0.1 g/mI NaOH(甲液)和0.05 g/mI CuSO4(乙液)。甲液配制方法是将50 g氢氧化钠和137 g酒石酸钾钠溶于500 mI蒸馏水中(贮于带橡皮塞的瓶中)。乙液配制方法是将34.5 g结晶硫酸铜溶于500 ml水中，加0.5 mI硫酸。混合均匀。
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液；双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液.先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL，振荡均匀（营造碱性环境），再加入1～2滴双缩脲试剂B，振荡均匀。
3、使用方法不同：
斐林试剂使用时，先反溶液和溶液混合（将滴溶液滴入溶液中），而后立即使用。
双缩脲试剂使用时，先加入溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴溶液，振荡摇匀后观察现象。
双缩脲A液和B液有什么区别？
1、物质不同双缩脲试剂A液是NaOH的水溶液。双缩脲试剂B液是CuSO4的水溶液。
2、浓度不同双缩脲试剂A液的质量分数为0.1 g/mL。双缩脲试剂B液的质量分数为0.01 g/mL。
3、作用不同加入双缩脲试剂A液为了营造碱性环境，加入量一般为3毫升。双缩脲试剂B液是为了使蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。加入量较少，只有几滴。扩展资料注意事项：在使用双缩脲试剂时候是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠NaOH溶液，则无法充分制造碱性环境。 双缩脲是一种化学物质，而检测蛋白质用的那两个试剂之所以叫双缩脲试剂，是因为检测原理和双缩脲的形成相似。
